Técnica de reação em cadeia da polimerase PCR para que serve?

PCR significa Reação em Cadeia de Polimerase. A PCR é um fotocopiadora molecular. Através do termociclador é feita a amplificação de segmentos de DNA

- Finalidade de amplificação de um segmento específico de DNA.
- Gera quantidade de DNA suficiente para manipulação e análise subsequentes.
- É um método in vitro rápido, sensível e versátil para amplificação seletiva de sequencias definidas de DNA ou de RNA a partir de amostras complexas de ácidos nucleicos, é o que explica a Profa. Dra. Emilene Galvão, Pós Doutorado em Inspeção de Produtos de Origem Animal pelo curso de Medicina Veterinária da Universidade Federal de Viçosa. Doutora e Mestre em Microbiologia Agrícola.

a) Principais reagentes necessários para a replicação:

- Água
- Tampão: pode ser composto por detergente, sal entre outros. Confere estabilidade para que a enzima funcione corretamente.
- DNA molde
- Iniciadores (primers)
- Nucleotídeos
- Mg++
- DNA Polimerase (Taq)

b) Etapas da PCR

O processo de replicação in vitro vai ocorrer pela presença desses reagentes para simular a replicação in vitro e vai ser dado principalmente por alterações na temperatura.

- Ciclos da temperatura:
Temperatura de desnaturação
Temperatura de ligação dos iniciadores
Temperatura de extensão da fita de DNA
Eletroforese em gel

Figura 1 – Replicação in vitro: Reagentes e ciclos de temperatura: Ciclos

C) Tipos de PCR e aplicações na Veterinária

Existem vários tipos de PCR, como por exemplo o PCR Multiplex e o SSCP-PCR:

PCR Multiplex – passa pelas mesmas etapas da PCR apresenta anteriormente, porém na PCR multiplex mais de um segmento genômico é amplificado em uma única reação, cada um com seu par de primers específico.
Esse tipo de PCR é usado para investigação de paternidade; diagnóstico de doenças; identificação de transgênicos, detecta vários genes de uma só vez

SSCP-PCR - Single Strand Conformation Polymorphism, essa técnica possibilita identificar polimorfismo em uma das fitas do DNA.
Dentre outros como MSP – Metilação PCR Específica, RAPD – PCR Rondômico, NESTD-PCR-PCR de Alta Especificidade, PCR-Tempo Rea

D) Aplicações da PCR à Veterinária

O exame de PCR é utilizado em animais, pois a Organização Mundial da Saúde autorizou, por se tratar de uma técnica rápida e muito sensível.

Várias doenças como Micoplasmoce, Anemia infecciosa das galinhas (aves), Leucose Enzoótica e Babesiose (bovinos), Leptospirose e Parvovirose (cães) e Leucemia e Peritonite infecciosa (gatos), e várias outras doenças em ovinos, caprinos, equinos e suínos.

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